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                > 新闻资讯

                荧光western blot的一些建议

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                点击次数:1001 更新时间:2020年05月14日19:51:01 打印此页 关闭

                荧光western blot的一些建议


                荧光western blotting是一种荧光标记检测抗体直接检测蛋白表达水平的『技术。由于数字成像技术和荧光western blotting试剂的最新进展,这种方法正变得越来越流行。不太确定这个技术开展荧光western blotting的原因

                如果你决定尝试在实验室开展荧光western blotting,可以使用以下小技巧来优化你的protocol和增强你的WB经验。


                提高灵敏度

                ?          使用高灵敏度的标签。量子¤点纳米球荧光二抗将帮助实现更高的灵敏度

                ?          如果无法检测到目标蛋白,可以尝试将膜干燥后再显影,干燥可※能会增加信号强度4--10

                ?          减少样品、一抗和二抗的浓度,这样可以最大限度地减少实验样品中的非特异干∏扰

                ?          换用不太强的封闭剂可以帮助增加信号强度,但这也会增加非特异信号。例如将酪蛋白稀释到0.5倍,或使用鱼或牛血清白蛋白(BSA)封闭剂。

                降低非特异性吸附

                ?          使用酪蛋白作为封闭剂,可以最大限度地减少非特异性结合

                ?          如果信号很强且有很多非特异性结合,可以稀释一抗和二抗浓度

                减少背景荧光

                ?          使用长波长的荧光抗体(620nm)可以大大降低膜的自发荧光。

                ?          使用短波长的荧光抗体(520nm),检测含量丰富的靶点,如内参蛋白(GAPDH)

                ?          使用低荧光(LF)-PVDF膜,因为它们可以最小化背景电平(与常规PVDF膜相比,在某种程度上,硝化纤维素膜)

                ?          避免使用彩色ladder,尽量使用非预染或蓝色预染ladderladder上样尽量少

                下一条:中国农业大学发表量子点在农残现场快速检测的相关应用文章